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选择合适的抗体是建立成功竞争法ELISA的关键步骤。根据竞争法的原理和实际应用经验，选择抗体时需重点关注以下几个方面：
1、抗体类型与特异性
竞争法ELISA通常需要?高特异性?的抗体，以避免与样本中结构类似物发生交叉反应。例如，在检测真菌（1,3）-β-D-葡聚糖时，需筛选对目标抗原高效价且交叉反应弱的抗体。对于小分子抗原（如镉离子），需通过免疫原设计（如螯合物偶联）获得特异性抗体。
2、抗体效价与亲和力
抗体的?效价?和?亲和力?直接影响检测的灵敏度和线性范围。例如，口蹄疫抗体检测中使用的抗体需具备高阻断率（70%-80%）和良好的重复性。A型塞内卡病毒VP2蛋白抗体的效价需大于1:64000以确保检测灵敏度。
3、抗体配对与竞争机制
竞争法需明确抗体与抗原的竞争关系：
?检测抗体?：通常选择酶标记的抗体，需保留免疫活性和酶活性。
?包被抗体?：需与酶标抗体竞争结合同一抗原表位，确保信号强度与样本抗原浓度成反比。例如，乙肝核心抗体检测中，加样方式不同会导致阳性率差异显着。
4、应用场景适配
?大分子抗原?：优先选择夹心法；?小分子抗原?（如激素、药物）或?半抗原?（如农药残留）更适合竞争法。
?复杂样本?：若样本含干扰物（如血清中的IgG），需通过捕获包被法去除干扰后再进行竞争检测。
5、实验验证
建立方法后需验证抗体的?特异性?（如Western blot）、?灵敏度?（检测限）和?重复性?（批内/批间CV<15%）。例如，非洲猪瘟pK205R抗体检测需与商品化试剂盒对比符合率（79.92%）。
总结?：选择抗体时需结合目标物特性（分子大小、结构）、样本复杂度及实验需求，通过效价、特异性、配对验证等步骤筛选，最终通过灵敏度、重复性等指标验证方法的可靠性。
